Різниця між прямою та непрямою імунофлюоресценцією

The ключова різниця між прямою та непрямою імунофлуоресценцією є те, що пряма імунофлуоресценція використовує одиночне антитіло, яке працює проти цілі, що цікавить, тоді як непряма імунофлуоресценція використовує два антитіла для мічення цілі, що цікавить.

Імунофлюоресценція або візуалізація клітин - це техніка, яка використовується для маркування специфічного антигену-мішені фторофором. Тут фторофор є флуоресцентною хімічною сполукою, яка може випромінювати світло при збудженні світла. Коли фторфор зв'язується з цільовим антигеном, він дозволяє виявляти молекулу-мішень у зразку. Для подальшого його опису, коли антиген зв'язується зі специфічним антитілом, він може бути кон'югований з фторофорами. Отже, при спостереженні під флуоресцентним мікроскопом легко виявити наявність цільового антигену в зразку..

Крім того, існує два типи імунофлуоресценції; пряма і непряма імунофлуоресценція. Різниця між прямою та непрямою імунофлуоресценцією полягає головним чином у кількості використовуваних антитіл та кон'югації фторофору. Тобто при прямій імунофлуоресценції флуорофор безпосередньо кон'югується з первинним антитілом, тоді як у непрямій імунофлуоресценції кон'югат фторофору з вторинним антитілом.

ЗМІСТ

1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке пряма імунофлюоресценція
3. Що таке непряма імунофлуоресценція
4. Подібність між прямою та непрямою імунофлюоресценцією
5. Порівняльне порівняння - Прямий проти непрямої імунофлюоресценції у табличній формі
6. Підсумок

Що таке пряма імунофлюоресценція?

Імунофлуоресценція використовує антитіла для виявлення специфічних антигенів-мішеней. Пряма імунофлуоресценція - один з двох типів імунофлуоресценції. У прямій імунофлуоресценції бере участь одне антитіло (первинне антитіло), і фторфор безпосередньо кон'югується з первинним антитілом. Зв'язуючи антитіло з цільовим антигеном, фторофор випромінює флуоресценцію, яка може бути виявлена ​​флюоресцентним мікроскопом.

Малюнок 01: Пряма імунофлуоресценція

Однак пряма імунофлуоресценція є дорогим методом, оскільки первинні кон'юговані антитіла є дорогими порівняно з вторинними антитілами. Тим не менш, це не передбачає додаткового кроку, отже, скорочення техніки. Крім того, неспецифічні зв'язки знижуються при прямій імунофлуоресценції. Отже, видова перехресна реакція низька. Але при виявленні чутливість прямої імунофлуоресценції є слабкою порівняно з непрямою імунофлуоресценцією .

Що таке непряма імунофлюоресценція?

Непряма імунофлуоресценція - це другий тип імунофлуоресценції, який включає два типи антитіл, такі як первинні та вторинні антитіла в маркуванні цільового антигену. У цьому способі фторфор кон'югується з вторинним антитілом. Отже, ця методика передбачає додатковий крок.

Малюнок 02: Імунофлуоресценція

Однак чутливість у цього методу висока, оскільки кілька флюорофорів можуть бути кон'юговані з вторинними антитілами, і це полегшує виявлення. Крім того, непряма імунофлуоресценція дешевша через те, що кон'югація вторинних антитіл є менш дорогою та легшою. У порівнянні з прямою імунофлуоресценцією видова перехресна реактивність висока при непрямому методі.

Які подібності між прямою та непрямою імунофлюоресценцією?

• Вони є двома видами методу імунофлуоресценції.
• Первинні антитіла та флуорофор беруть участь в обох методах.
• Також реакція антиген-антитіло відбувається в обох методах.
• Крім того, і пряма, і непряма імунофлуоресценція використовує флуоресцентний мікроскоп для виявлення антигену.

Яка різниця між прямою та непрямою імунофлюоресценцією?

Імунофлуоресценція може бути прямою або непрямою на основі кон'югації фторофору з використовуваними антитілами. При прямій імунофлуоресценції фторфор кон'югується з первинним антитілом, яке є єдиним антитілом, яке бере участь у цій методиці. На відміну від цього, при непрямій імунофлуоресценції фторфор кон'югується з вторинним антитілом, яке є одним із двох типів антитіл, які беруть участь у техніці. Отже, головна відмінність прямої та непрямої імунофлуоресценції - це тип антитіла, який кон'югується з фторофором.

Наступна інфографіка дає порівняльне порівняння різниці між прямою та непрямою імунофлуоресценцією.

Підсумок - Прямий проти непрямої імунофлюоресценції

Імунофлуоресценція - це методика, яка використовується для виявлення наявності в зразку специфічних антигенів. У цій методиці використовуються специфічні антитіла. Тому в цьому антитіла кон'югуються з флюорофорами для їх виявлення за допомогою флуоресцентного мікроскопа. Більше того, існує два типи імунофлуоресценції, а саме пряма та непряма імунофлуоресценція. Пряма імунофлуоресценція включає одиночне антитіло і фторофор, безпосередньо кон'юговані з цим антитілом. Непряма імунофлуоресценція включає два антитіла; первинний і вторинний і флюорофор кон'юговані з вторинним антитілом. Оскільки декілька вторинних антитіл можуть зв'язуватися з первинним антитілом і кілька фторфорів можуть кон'югуватися з вторинними антитілами, непряма імунофлуоресценція є більш чутливим методом, ніж прямий метод. Крім того, непрямий метод дешевше, ніж прямий. Таким чином, це різниця між прямою та непрямою імунофлуоресценцією.

Довідка:

1. «Імунофлуоресценція». Wikipedia, Фонд Вікімедіа, 19 серпня 2018. Доступний тут 

Надано зображення:

1. "HSP IF IgA" Еммануельма на en.wikipedia, (CC BY 3.0) через Вікісховище Commons
2. "Іммунофлуоресценція" Westhayl618 - Власна робота, (CC BY-SA 4.0) через Commons Wikimedia