Різниця між вилученням ДНК та РНК

Ключова різниця - вилучення ДНК проти РНК
 

Вивчення ДНК та РНК є життєво важливими аспектами для розуміння основних понять молекулярної біології, біотехнології та генетики. Екстракція чистих зразків ДНК та РНК необхідна для проведення експериментальних процедур під час цих досліджень. Ключова різниця між вилученням ДНК та РНК полягає в тому, що Процес вилучення ДНК очищає ДНК, тоді як витяг РНК очищає РНК. Процес вилучення ДНК має три різні етапи: лізис клітин та катаболізм мембранних ліпідів та білків, згущення катаболітів концентрованим розчином солі та осадження ДНК етанолом. Процедура в три кроки може складатися з двох необов'язкових етапів. Процес очищення РНК складається з чотирьох різних етапів: додавання тіоціанату гуанідію для лізису клітин, денатурація білка, включаючи рибонуклеази, відділення РНК додаванням хлороформу та фенолу та промивання осаду за допомогою етанолу.

ЗМІСТ

1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке вилучення ДНК
3. Що таке екстракція РНК
4. Подібність між вилученням ДНК та РНК
5. Порівняльне порівняння - вилучення ДНК проти РНК у табличній формі
6. Підсумок

Що таке вилучення ДНК?

Екстракція ДНК - це фізичний та хімічний процес, який використовується для очищення ДНК із зразка. Вилучення ДНК є важливим аспектом у контексті молекулярної біології та судових наук. Процес складається з трьох основних етапів. Спочатку слід отримати клітини, що цікавлять. Далі полегшується лізис клітин для того, щоб порушити клітинну мембрану, яка відкриває клітину і відкриває цитоплазму разом з ДНК. Поверхнево-активні речовини або інші миючі засоби можуть бути використані для лізингу ліпідів з клітинної мембрани, тоді як наявні білки катаболізуються протеазами. Це необов'язковий крок. Після того як клітина лізується, скупчення катаболізованих молекул сприяє концентрованим сольовим розчинам. Після цього відбувається центрифугування розчину, який відокремлює скупчення сміття від ДНК. На цій стадії диференційована ДНК змішується з реагентами та солями, що використовуються протягом клітинного циклу.

Малюнок 01: Вилучення ДНК

Для подальшого очищення можна використовувати наступні етапи. Одним із методів є осадження етанолом, яке включає змішування крижаного етанолу з відокремленим зразком ДНК. ДНК нерозчинна в спирті і, таким чином, утворюється гранула завдяки агрегації молекул ДНК разом. Ацетат натрію додають у цьому процесі для підвищення ступеня осадження за рахунок збільшення іонної сили. Окрім процесу осадження етанолу, для цього також може бути індукований процес вилучення фенолу-хлороформу. У цьому способі фенол денатує білки, присутні у зразку. Після центрифугування денатуровані білки залишаться в органічній фазі, тоді як молекули ДНК, змішані з хлороформом, будуть знаходитись у водній фазі. Хлороформ видалить залишки фенолу. Після завершення екстракції ДНК залишають розчиненою в буфері ТЕ або надчистої води.

Що таке екстракція РНК?

Очищення РНК - це процес, за допомогою якого РНК очищають з біологічного зразка. Через наявність рибонуклеази в клітинах і тканинах цей процес ускладнюється. Фермент рибонуклеази має здатність швидко руйнуватися РНК. Хімічна природа рибонуклеаз надзвичайно стійка, і їх важко інактивувати. Нейтралізація рибонуклеаз - це варіант. Оскільки цей фермент є всюдисущим у клітинах і тканинах, для вилучення РНК розробляються спеціальні методики. З багатьох методів загальним методом є вилучення тиоцинату гуанідінію-фенол-хлороформ.

Малюнок 02: Екстракція РНК

Метод вилучення тиоцинату-фенол-хлороформу гуанідини залежить від центрифугування та поділу фаз. Суміш, яку слід центрифугувати, складається з водного зразка та насиченого водою розчину, що складається з фенолу та хлороформу. Після центрифугування розчин складається з верхньої водної фази та нижчої органічної фази в нейтральних умовах рН (pH 7-8). РНК присутня у водній фазі. Органічна фаза зазвичай складається з білків, розчинених у фенолі, та ліпідів, розчинених у хлороформі. Додається хаотропний агент (молекула, яка має здатність розривати водневі зв’язки між молекулами води); це відомо як тиоціанат гуанідінію. Цей агент має здатність денатурировать білки, які включають рибонуклеази, які можуть деградувати РНК і беруть участь у лізисі клітин. Він також відокремлює рРНК від рибосомальних білків. Кінцевим етапом очищення РНК є промивання осаду водної фази етанолом. РНК також можна очистити, використовуючи рідкий азот.

Які подібності між вилученням ДНК та РНК?

• В обох процесах вилучення використовуються шкідливі хімічні речовини, такі як фенол та хлороформ.
• Центрифугування є важливою методикою для обох процесів.
• Етанол використовують для промивання осаду та отримання очищеної ДНК або РНК.

Яка різниця між вилученням ДНК та РНК?

Вилучення ДНК проти РНК
Екстракція ДНК - це процес, який витягує ДНК з організму чи зразка.	Екстракція РНК - це процес, який витягує РНК із зразка.
Кроки
Процес вилучення ДНК складається з трьох різних етапів з двома необов'язковими етапами.	Процес вилучення РНК складається з чотирьох різних етапів.
Реагенти
Для вилучення ДНК використовують поверхнево-активні речовини, протеази (необов'язково), спирт, хлороформ, фенол, ацетат натрію.	Для вилучення РНК використовують тиоціанат гуанію, хлороформ, фенол, етанол.

Підсумок - Вилучення ДНК проти РНК

Вилучення ДНК та РНК є життєво важливими аспектами експериментальних процедур вивчення молекулярної біології, генетики та біотехнології. Обидва процеси включають подібні реагенти, але для вилучення РНК використовується спеціальний реагент, відомий як тіоціанат гуанідію, який знижує активність рибонуклеаз. У цьому головна відмінність вилучення ДНК та РНК.

Завантажити PDF версію ДНК проти вилучення РНК

Ви можете завантажити PDF-версію цієї статті та використовувати її в офлайн-цілях відповідно до примітки. Завантажте PDF-версію тут Різниця між вилученням ДНК та РНК

Довідка:

1. Чомчинський, Р і Н Саккі. "Одностадійний метод виділення РНК шляхом вилучення кислоти гуанідініова тіоціанат-фенол-хлороформ." Аналітична біохімія., Національна медична бібліотека США, 1987 р., Доступна тут. Доступ 31 серпня 2017 року
2. Хіндаві. "ДНК, РНК і видобуток білка: минуле і сучасність". BioMed Research International, Hindawi, 30 листопада 2009 р., Доступний тут. Доступ 31 серпня 2017 року.

Надано зображення:

1. "ДНК, витягнута з авокадо" Майком Сейфаном - спочатку була розміщена на Flickr як успіх (CC BY 2.0) через Wikimedia Commons
2. «Вилучення PhOH-CHCl3» Сквідонієм (бесіда) - Власна робота (Оригінальний текст: саморобний) (Загальнодоступне) через Commons Wikimedia