Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) - це метод ампліфікації ДНК, який використовується в молекулярно-біологічних програмах. Це поширена методика, яка робить мільйони до мільярдів копій особливо зацікавленої послідовності ДНК. Це в пробірці метод, що виконується в лабораторіях. Метод ПЛР повністю залежить від комерційно виготовленої ДНК-полімерази під назвою Taq полімераза. А також вимагає декількох інших компонентів та належного підтримання температури. Один важливий компонент - праймери. Праймери - це короткі послідовності ДНК, спеціально розроблені для цільової послідовності ДНК. Зазвичай вони мають довжину близько 20 нуклеотидів. Полімераза Taq каталізує додавання нуклеотидів до попередньої нуклеотидної послідовності. Отже, праймери служать вихідними точками синтезу нових ниток. Полімераза Taq працює лише в напрямку 5 'до 3', отже синтез ДНК відбувається в тому ж напрямку 5 'до 3'. Оскільки ДНК є дволанцюговою, в ПЛР потрібні два типи праймерів. Вони відомі як передній ґрунтовник і зворотний праймер. Передній і зворотний праймери називаються виходячи з напрямку подовження праймера в ДНК, коли відбувається синтез ДНК. Передній праймер віджигає антисмисловим ланцюгом ДНК і ініціює синтез + ve ланцюга гена в напрямку від 5 'до 3'. Зворотний праймер відпалює сенсорну нитку і ініціює синтез комплементарної ланцюга кодуючої нитки; що являє собою -перехід ланцюга гена в 5'-3 'напрямок. Це ключова різниця між прямим і зворотним праймерами.
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке форвард-буквар
3. Що таке зворотний праймер
4. Подібність між форвардом уперед та назад
5. Порівняльне порівняння - вперед та назад грунтовка в табличній формі
6. Підсумок
Орієнтація вперед - це синтез кодуючої нитки або сенсорної ланцюга гена. Полімераза Taq каталізує синтез нової нитки в напрямку 5 'до 3'. Синтез кодуючої нитки відбувається, коли праймер відпалює некодування або антисмислову нитку і подовжується в напрямку 5 'до 3'.
Малюнок 01: Передні та зворотні праймери
Праймер, який віджигає антисмисловим ланцюгом або ниткою, що не кодує, або ланцюг шаблону, відомий як передній праймер, оскільки передній праймер виступає вихідною точкою синтезу кодуючої або позитивної ланцюга гена. Передній праймер має коротку нуклеотидну послідовність, яка доповнює 3 'фланкуючий кінець антисмислової нитки. Він гібридизується з антисмисловим ланцюгом і полегшує полімеразу Taq для додавання нуклеотидів, які є комплементарними ланцюжком шаблону..
Зворотний праймер - це коротка послідовність ДНК, яка відпалює 3 'кінцем смислової ланцюга або ланцюгом кодування. Зворотний праймер служить вихідною точкою для синтезу комплементарної ланцюга кодуючої послідовності або послідовності, що не кодує. Зворотний праймер розроблений як доповнення до 3 'кінця нитки кодування. Отже, він відпалює фланкуючим 3 'кінцем кодуючої ланцюга і дозволяє полімеразі Taq синтезувати антисмислову нитку або ланцюжок шаблону. Оскільки його орієнтація є зворотним способом, цей праймер маркується як зворотний праймер.
Як зворотний, так і прямий праймери важливі для отримання мільйонів до мільярдів копій окремих областей ДНК, націлених або зацікавлених.
Forward Primer vs Reverse Primer | |
Передній праймер - це коротка послідовність ДНК, яка гібридизується з 3 'кінцем некодуючого або шаблону гена і служить вихідною точкою для синтезу кодуючої послідовності. | Зворотний праймер - це коротка послідовність ДНК, яка гібридизується з 3 'кінцевим кодуванням або нешаблоновим ланцюгом і служить вихідною точкою для синтезу некодуючої послідовності. |
Віджиг пасма | |
Відвертає передній праймер з віджимом шаблону. | Зворотні грунтовки відпалюють за допомогою нитки без шаблону. |
Результат нової послідовності | |
Передній праймер полегшує синтез кодуючої послідовності. | Зворотний праймер полегшує синтез послідовності, що не кодує. |
Існує два типи праймерів, які беруть участь у техніці ПЛР. Це прямі та зворотні праймери. На основі подовження праймера в синтезі нових ланцюгів ДНК ці праймери маркуються або називаються. Полімераза Taq синтезує нову ДНК в орієнтації 5 'до 3'. Отже, праймери розроблені як доповнення до 3 'кінців подвійних ниток. Передній праймер, який подовжується в напрямку 5 'до 3', гібридизується з 3 'кінцем антисмислового шаблону або шаблоном або некодуючою послідовністю. Він служить вихідною точкою для синтезу послідовності кодування. Зворотний праймер, який подовжується в напрямку 5 'до 3', гібридизується з 3 'кінцем кодування або нешаблоном або сенсорною ланцюжком. Він служить вихідною точкою для синтезу некодуючої послідовності. Це різниця між передньою і зворотною грунтовкою.
1. «Буквар (молекулярна біологія)». Wikipedia, Фонд Вікімедіа, 20 лютого 2018 р. Доступний тут
2. "Ланцюгова реакція полімерази (ПЛР)." Академія хана. Доступний тут
1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - власна робота, (CC BY-SA 3.0) через Wikimedia Commons