Різниця між гелевим електрофорезом та SDS

Ключова відмінність - гелевий електрофорез та сторінка SDS
 

Гель-електрофорез - це техніка, яка відокремлює макромолекули в електричному полі. Це звичайний метод молекулярної біології для відділення ДНК, РНК та білків від сумішей відповідно до їх молекулярних розмірів. SDS Page - це різновид гель-електрофорезу, який використовується для відділення білків від білкової суміші виходячи з їх розмірів. Гель-електрофорез - це термін, що використовується для позначення звичайної методики, що застосовується для поділу ДНК, РНК та білка поки SDS Page - це один із типів гелевого електрофорезу. Це ключова відмінність гелевого електрофорезу від SDS Page.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке гель-електрофорез
3. Що таке сторінка SDS
4. Поплечне порівняння - гелевий електрофорез та сторінка SDS
5. Підсумок

Що таке гель-електрофорез?

Гель-електрофорез - поширена методика, яка використовується в лабораторіях для відділення заряджених молекул, таких як ДНК, РНК, білки тощо від їх сумішей. Гель використовується в гель-електрофорезі. Він діє як молекулярне сито. Існує два типи гелів, які використовуються в гелефофорезі, а саме агароза та поліакриламід. Вибір гелю та гелевого препарату є важливими факторами, які слід враховувати в гелевих електрофорезах, оскільки розмір пор гелю повинен бути ретельно маніпульований для гарного поділу молекул за допомогою гель-електрофорезу. Гель-електрофорез має електричне поле, з'єднане з двома кінцями гелю. Один кінець гелю демонструє позитивний заряд, а інший - негативно заряджений.

ДНК і РНК - негативно заряджені молекули. Після того, як вони завантажуються в гель з негативного кінця гелю і наносяться на електричне поле, вони мігрують через пори гелю до позитивно зарядженого кінця гелю. Швидкість міграції залежить від заряду та величини молекули. Менші молекули легко мігрують через пори гелю, ніж більші молекули. Отже, менші молекули проходять велику відстань через гель, а більші молекули проходять невелику відстань. Для спостереження за поїздкою молекул на гель використовуються спеціальні види барвників. Електричне поле застосовується на певний проміжок часу і зупиняється для запобігання втрат молекул та утримання молекул у своїх пройдених положеннях. У гелі можна спостерігати різні смуги. Ці смуги представляють молекули різної величини. Отже, гель-електрофорез корисний для диференціювання молекул відповідно до їх розмірів.

Гель-електрофорез включається в різні методи в якості препаративної методики в молекулярній біології, такі як ПЛР, RFLP, клонування, секвенування ДНК, південне промазування, картографування генома тощо.

Малюнок 01: Електрофорез агарозного гелю

Що таке сторінка SDS?

Електрофорез гель-додецилсульфату натрію поліакриламіду (SDS Page) - це тип електрофорезу гелю, який використовується для розділення білків. Коли електрофорез гелю використовується для розділення білків, потрібні спеціальні методи лікування, оскільки білки не заряджаються негативно, як ДНК і РНК, і не мігрують до позитивного або негативного кінця. Отже, білки денатуровані і покриті негативним зарядом до гель-електрофорезу. Це робиться за допомогою миючого засобу, який називається додецилсульфатом натрію (SDS). Гелевий електрофорез, який використовує SDS та поліакриламідний гель для підтримуючого середовища, відомий як SDS Page. Ця методика зазвичай використовується в біохімії, генетиці, криміналістиці та молекулярній біології.

Під час SDS Page білки змішуються з SDS. SDS розгортає білки в лінійну форму і покриває їх негативним зарядом, пропорційним їх молекулярній масі. Через негативний заряд молекули білка мігрують до кінця гелю з позитивним зарядом і відокремлюються відповідно до їх молекулярної маси. У SDS Page, поліакриламід використовується як тверда підставка для гелю. Фактичне поділ білків головним чином залежить від властивостей гелю. Отже, приготування поліакриламідного гелю слід ретельно виконувати та застосовувати правильні концентрації поліакриламіду. Поліакриламідні гелі демонструють більшу роздільну здатність, ніж гелі агарози. Отже, SDS Page вважається високою роздільною здатністю для поділу білка.

SDS Page - це тип денатураційного гель-електрофорезу. Це має основне обмеження в аналізі білка. Оскільки SDS денатурує білки до сепарації, це не дозволяє виявити ферментативну активність, взаємодію зв'язування білка, кофактори білка тощо.

Малюнок 02: Сторінка SDS

Яка різниця між гелевим електрофорезом та SDS Page?

Гелевий електрофорез проти SDS
Гель-електрофорез - це метод, що виконується для розділення макромолекул за допомогою електричного поля.	SDS Page - це метод гелевого електрофорезу з високою роздільною здатністю, який використовується для розділення білків на основі їх маси.
Гель Run
Він може виконуватися в горизонтальному або вертикальному вигляді.	Сторінка SDS завжди працює вертикально.
Основи відокремлення
Поділ відбувається відповідно до заряду та розміру.	Розділення білка відбувається відповідно до маси та заряду.
Дозвіл
Електрофорез гелю агарози має низьку роздільну здатність, а електрофорез поліакриламідного гелю має більш високу роздільну здатність	Сторінка SDS має кращу роздільну здатність.
Денатурація
Гель-електрофорез включає як денатурирующие, так і неденатураційні методи.	Сторінка SDS денатурує білки до поділу.

Підсумок - Електрофорез гелю проти SDS

Гель-електрофорез - поширена методика, яка використовується для поділу та аналізу ДНК, РНК та білків на основі їх розмірів та заряду. Існує два основних типи гелевого електрофорезу, а саме електрофорез агарозного гелю та електрофорез поліакриламідного гелю. Гелі агарози використовуються в основному для поділу нуклеїнових кислот; коли потрібна більш висока роздільна здатність, використовуються поліакриламідні гелі. SDS Page - це тип електрофорезу гелю, який зазвичай використовується для розділення складних сумішей білків. Це розглядається як техніка поділу білка високої роздільної здатності. Це різниця між гелевим електрофорезом та SDS Page.

Список літератури:
1. Новоковський, Ендрю Б., Вільям Дж. Вобіг та Девід Х. Пітінг. “Native SDS-PAGE: Електрофоретичне розділення білків високої роздільної здатності із збереженням корінних властивостей, включаючи зв'язані металеві іони. www.ncbi.nlm.nih.gov. N.p., травень 2014. Веб. 7 квітня 2017 року
2. Stellwagen, Nancy C. "Електрофорез ДНК в агарозних гелях, поліакриламідних гелях та у вільному розчині". Електрофорез. Національна медична бібліотека США, червень 2009 року. Веб. 07 квітня 2017р

Надано зображення:
1. "Гелелектрофореасппарат" (CC BY-SA 3.0) через Wikimedia Commons
2. "ДНК агарозний гелефофорез" школи природних ресурсів з Ен-Арбор - лабораторія ДНК (CC BY 2.0) через Commons Wikimedia