Різниця між GFP та EGFP

The ключова різниця між GFP та EGFP є те, що GFP є білок дикого типу, включений в молекулярне клонування клітин не ссавців, тоді як EGFP є поліпшеним або сконструйованим типом GFP, який може бути використаний на клітинах ссавців.

Клонування молекули - це вдосконалена методика, якою вчені безперешкодно використовують експресію білків за допомогою рекомбінантної технології. У технології рекомбінантних ДНК необхідно успішно трансформувати рекомбінантний вектор для прийому організму. Отже, під час процесу трансформації слід виявити та підтвердити, чи був трансформований геном господар чи ні. Щоб оцінити це, молекулярні біологи застосовують кілька методик. З цих методів один - репортерний ген. Ці репортерні гени діють як вибіркові маркери для вибору правильних трансформантів. Таким чином, зелений флуоресцентний білок (GFP) і посилений зелений флуоресцентний білок (EGFP) - два білки-репортери, що використовуються при молекулярному клонуванні.

ЗМІСТ

1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке GFP
3. Що таке EGFP
4. Подібність між GFP та EGFP
5. Порівняльне порівняння - GFP проти EGFP у табличній формі
6. Підсумок

Що таке GFP?

GFP - це білок дикого типу, який містить 238 амінокислотних залишків і кілька виділених областей амінокислотних послідовностей, які відрізняють його від інших флуоресцентних білків. Крім того, цей білок дикого типу спочатку знаходився в ізоляції від Акварея Вікторія; вид медуз. Однак у природних явищах медузи змогли виробляти флуоресценцію зеленого кольору у відповідь на певні подразники.

Раніше ця концепція дивувала вчених, і вони вирішили використовувати її на своїх рекомбінантних ДНК-технологіях. Отже, вчені використовували цю мутантну форму гена дикого типу як репортерний ген у своїх дослідженнях експресії генів. Ген GFP дикого типу здатний продукувати білок, який дає флуоресценцію при кімнатній температурі або під УФ-світлом. Тому, вставляючи в трансформанти, він виражає і виробляє флуоресценцію. Якщо після процесу трансформації виникає флуоресценція, це підтверджує успіх процесу трансформації. Простими словами, випромінювання флуоресценції сигналізує про успішну трансформацію вектора, що переносить цікавий ген у господаря.

Малюнок 01: GFP

З цієї причини GFP виступає як у природніх умовах маркер експресії генів. В даний час для отримання GFP використовуються методи генної інженерії. Також доступно багато вдосконалених версій GFP, таких як EGFP. Отже, це дозволяє ефективно використовувати GFP в дослідженнях молекулярного клонування та експресії генів.

Що таке EGFP?

Покращений зелений флуоресцентний білок або EGFP - це вдосконалена версія GFP. Простими словами, ми можемо визначити EGFP як розроблену версію GFP дикого типу. Коли ген GFP дикого типу мутує, він сприятливо впливає. Отже, мутований ген GFP дозволяє експресувати нові символи, і в результаті цього ми можемо виробляти посилений GFP з покращеними характеристиками. Крім того, ми можемо успішно впроваджувати мутації в ген GFP дикого типу, використовуючи опромінення або хімічні методи. Ці мутовані гени потім виробляють EGFP, який має більш корисні характеристики.

Малюнок 02: EGFP

Поліпшені характеристики EGFP такі:

• Здатний випромінювати сильніші флуоресцентні сигнали.
• Має високу чутливість.
• Можна використовувати його на клітинах ссавців замість прокаріотів та інших еукаріотів нижчого рівня.
• Також забезпечує підвищену чистоту продукту.

Тому, порівняно з GFP, EGFP є кращим вибором для досліджень експресії генів. Однак продукт дорожчий порівняно з GFP.

Які подібності між GFP та EGFP?

• GFP і EGFP - два білки, які мають здатність виділяти зелений колір
• Тому обидва функціонують як репортерні білки в дослідженнях експресії генів.
• Також можливий синтез обох за допомогою технології рекомбінантної ДНК.
• Більше того, ці два типи легко мутувати далі для синтезу вдосконалених форм.

Яка різниця між GFP та EGFP?

Репортерний ген - це ген, який зв'язується з цікавим геном у технології рекомбінантних ДНК. Він сигналізує про успішну трансформацію рекомбінантного вектора в хазяїна. Тут GFP і EGFP - це два типи зелених світлоцвітних білків, які працюють як репортерні білки. Однак ключова відмінність між GFP та EGFP полягає в тому, що GFP є диким типом, тоді як EGFP - це інженерна версія GFP. Крім того, EGFP має більш корисні характеристики, ніж GFP. Наприклад, EGFP виробляє сильніше люмінесцентне світло і є більш чутливим, ніж GFP. Ще одна відмінність між GFP та EGFP - це системи, в яких ми можемо їх використовувати. Системи, що не ссавці, використовують GFP, тоді як системи ссавців використовують EGFP.

Інфографіка нижче представлена ​​різницею між GFP та EGFP у табличній формі.

Підсумок - GFP проти EGFP

GFP і EGFP є репортерними білками в дослідженнях молекулярного клонування та експресії генів. GFP - білок дикого типу, який являє собою зелений флуоресцентний білок. Білок спочатку знаходився в ізоляції від медуз Aequorea victoria. На відміну від цього, EFGP - це посилена форма білка GFP. Це мутант дикого типу з покращеними характеристиками. Отже, EFGP має більшу силу сигналу та більшу чутливість. Тому ми можемо використовувати його на векторах ссавців. На відміну від цього, використання GFP в основному лише на векторах, які не ссавці. Загалом, це різниця між GFP та EGFP.

Довідка:

1.Cinelli, R A та ін. «Покращений зелений флуоресцентний білок як інструмент аналізу динаміки та локалізації білка: дослідження локальної флуоресценції на рівні одномолекулярних». Фотохімія та фотобіологія., Національна медична бібліотека США, червень 2000 р. Доступна тут  
2. "PDB101: Молекула місяця: Зелений флуоресцентний білок (GFP)." RCSB: PDB-101. Доступний тут

Надано зображення:

1. ”Флуоресцентний білковий фільм GFP” Ерін Род - власна робота, (CC BY-SA 4.0) через Вікісховище 
2. ”CA2 amigo2 eGFP миша” від Dudek, Serena; Куруана, Дуглас; Карстенс, Келлі - Власна робота, (CC BY-SA 3.0) через Вікісховище