Різниця між імунофлуоресценцією та імуногістохімією

Ключова різниця - Імунофлуоресценція проти Імуногістохімія
 

Діагностика хвороб, яка використовує молекулярно-біологічні методи, стала новою сферою технології клінічної лабораторії. Він включає всі тести та методи ідентифікації захворювання та розуміння причини захворювання шляхом аналізу ДНК, РНК або експресованих білків в організмі. Швидкий прогрес у молекулярній діагностиці дозволив провести основні дослідження щодо інфекційних та неінфекційних захворювань. Вони використовуються для визначення змін у послідовності або рівня експресії у вирішальних генах або білках, що беруть участь у захворюванні. Імунофлуоресценція (ІФ) та Імуногістохімія (IHC) - дві такі широко використовувані методи в біології раку. IF є типом IHC, де метод виявлення флуоресценції використовується для аналізу моноклональних та поліклональних антитіл, тоді як IHC використовує хімічні методи для виявлення моноклональних та поліклональних антитіл.. У цьому ключова відмінність ІФ та МГК.

ЗМІСТ

1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке імунофлуоресценція 
3. Що таке імуногістохімія
4. Подібність між Імунофлуоресценцією та Імуногістохімією
5. Поплечне порівняння - Імунофлуоресценція проти Імуногістохімія в табличній формі
6. Підсумок

Що таке імунофлуоресценція (ІФ)?

Імунофлуоресценція - це техніка виявлення, коли антитіла, які використовуються в аналізі, маркуються з використанням флуоресцентних барвників або флуоресцентних білків для виявлення. Мічені вторинні антитіла можуть призводити до небажаних фонових сигналів; тому методика IF заснована на маркуванні самого первинного антитіла в даний час, щоб уникнути небажаних сигналів під час виявлення. За допомогою цієї методики запобігається неспецифічне зв'язування між первинним та вторинним антитілом, і воно відбувається швидше, оскільки не є залученим вторинний етап інкубації. Якість даних також покращується.

Фігура 01: Подвійне імунофлуоресцентне фарбування для BrdU, NeuN та GFAP

Фторхроми або флуоресцентні барвники - це сполуки, які можуть поглинати випромінювання, переважно ультрафіолетове випромінювання. Коли частинки досягають основного стану із збудженого стану, вони випромінюють випромінювання, яке захоплюється та детектується детектором, утворюючи спектр. Важливим є те, що флуоресцентна мітка є сумісною та стабільною для конкретної реакції і її слід належним чином кон'югувати з антитілом для отримання точних результатів. Одним з найбільш використовуваних фторхромів є флуоресцеїновий ізотіоціанат (FITC), який має зелений колір, з піковими довжинами хвиль поглинання та випромінювання 490 нм та 520 нм відповідно. Родамін, інший засіб, що використовується в ІФ, має червоний колір і має чітку довжину хвилі піку поглинання та випромінювання 553 нм та 627 нм.

Що таке імуногістохімія (IHC)?

IHC - метод молекулярного тестування, який застосовується для виявлення та підтвердження наявності антигену в клітині-мішені. Клітина-мішень може бути інфекційною частиною, мікробним збудником або злоякісною пухлинною клітиною. IHC використовує моноклональні та поліклональні антитіла для визначення наявності антигенів, наявних на клітинній поверхні клітин-мішеней. Методика заснована на зв'язуванні антиген-антитіло. Детекційний маркер кон'югується з цими антитілами з метою виявлення присутності або відсутності конкретного антигену. Ці маркери можуть бути хімічними маркерами, такими як ферменти, флуоресцентно помічені антитіла або радіоактивно мічені антитіла.

Малюнок 02: Шматочок миші та мозку, забарвлений імуногістохімією

Найбільш популярне застосування IHC - в біології ракових клітин для виявлення наявності злоякісних пухлин, але воно також використовується для виявлення інфекційних захворювань.

Які подібності між імунофлуоресценцією та імуногістохімією?

• Імунофлуоресценція та імуногістохімія відбуваються в умовах in vitro.
• Обидві методи засновані на антиген-антитіло
• Обидва дуже швидкі методи.
• Результати методів можна відтворити.
• Обидва покращили якість даних.
• Ці методи використовуються в діагностиці раку та інфекційних захворювань.

У чому різниця між імунофлуоресценцією та імуногістохімією?

Імунофлуоресценція проти Імуногістохімія
IF - це метод виявлення, коли антитіла, які використовуються в аналізі, мітять за допомогою флуоресцентних барвників або флуоресцентних білків для виявлення.	IHC - це метод виявлення, коли антитіла, що використовуються в аналізі, маркуються з використанням хімічних речовин або радіоактивних елементів для виявлення.
Точність
Точність у техніці ІФ вище в порівнянні з ІХК.	Точність нижча в ІХК.
Специфіка
ЯКЩО конкретніше.	IHC менш специфічний.

Підсумок - Імунофлуоресценція проти Імуногістохімія

Молекулярні механізми призвели до багатьох змін у галузі медицини, спричинивши передові методи молекулярного тестування, які призвели до революцій у галузі діагностики. Ці винаходи призвели до швидкої та точної ідентифікації та підтвердження захворювання, тим самим дозволяючи успішному введенню та виробництву ліків. Ці методи також застосовуються у фармакології з метою пошуку мішеней лікарських засобів та підтвердження фармакокінетичних властивостей препарату під час метаболізму препарату. IF та IHC - це два діагностичні методи, які базуються на концепції зв'язування антигену та антитіл, хоча режим виявлення в обох методах відрізняється. ЯКЩО використовує принцип флуоресценції для виявлення антигену, а IHC використовує концепцію хімічної кон'югації для виявлення антигену. Це різниця між IF та IHC.

Завантажити PDF версію Імунофлуоресценції проти Імуногістохімії

Ви можете завантажити PDF-версію цієї статті та використовувати її в офлайн-цілях відповідно до примітки. Завантажте тут версію PDF тут. Різниця між імунофлуоресценцією та імуногістохімією.

Список літератури:

1. Аокі, Валерія та ін. "Пряма та непряма імунофлуоресценція". Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, доступний тут. Доступ 25 серпня 2017 року.
2. Дурайян, Джеяпрадха та ін. «Застосування імуногістохімії». Журнал фармації та біологічно пов'язаних наук, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, серпня 2012 р., Доступний тут. Доступ 25 серпня 2017 року.

Надано зображення:

1. "Подвійне імунофлуоресцентне фарбування для BrdU, NeuN і GFAP" Ма М, Ма Y, Yi X, Го R, Чжу W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Лю X. бета1 у мишей після інсульту зменшує об'єм інфаркту та збільшує нейрогенез у субвентрикулярній зоні; PMID 19077183 (CC BY 2.0) через Wikimedia Commons
2. «Гіпоталамус тканини миші, забарвлений ABC-Immunohistochemistry» Заббн - Власна робота (CC BY-SA 3.0) через Wikimedia Commons