Різниця між перекладом Ніка та розширенням грунтовки

Ключова різниця - переклад Ніка проти розширення грунтовки
 

Переклад Ніка та розширення праймерів - дві важливі методики, проведені в молекулярній біології. Ключова різниця між трансляцією ніків та розширенням грунтовки полягає в тому, що Процес трансляції нік виробляє мічені зонди для інших методів гібридизації поки метод розширення праймера ідентифікує конкретну послідовність РНК із суміші та розкриває інформацію про експресію мРНК. Обидві методи мають велике значення і регулярно виконуються в лабораторіях молекулярних досліджень.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке Нік Переклад
3. Що таке розширення грунтовки
4. Поплечне порівняння - переклад Ніка проти розширення грунтовки
5. Підсумок

Що таке переклад Ніка?

Переклад Ніка - важлива методика, яка використовується для підготовки мічених зондів для різних молекулярно-біологічних методик, таких як блоттінг, на місці гібридизація, флуоресцентна на місці гібридизація тощо. Це в пробірці метод маркування ДНК. ДНК-зонди використовуються для ідентифікації конкретних послідовностей ДНК або РНК. За допомогою міченого зонда конкретні фрагменти можна маркувати або візуалізувати зі складної суміші нуклеїнової кислоти. Тому мічені зонди готуються за допомогою різних методик, які використовуються для різних методик. Переклад Ніка - один з таких методів, який виробляє мічені зонди за допомогою ферментів DNase 1 та ДНК-полімерази 1.

Процес трансляції нік починається з активності ферменту DNase 1. DNase 1 вводить ніки у фосфатну основу дволанцюжкової ДНК шляхом розщеплення фосфодіефірних зв’язків між нуклеотидами. Після того, як ник буде створений вільною 3 'ОН-групою нуклеотиду буде виведено і на нього буде діяти фермент ДНК-полімерази 1. Активність екзонуклеази 5 'до 3' ДНК-полімерази 1 видаляє нуклеотиди від ники до напрямку 3 'ланцюга ДНК. Одночасно полімеразна активність ферменту ДНК-полімерази 1 працює і додає нуклеотиди для заміни видалених нуклеотидів. Якщо нуклеотиди були мічені, заміщення відбудеться міченими нуклеотидами, і це позначить ДНК для ідентифікації. Ця нещодавно синтезована мічена ДНК може бути використана в якості зондів при різних реакціях гібридизації в молекулярній біології.

Малюнок 01: Процес перекладу Ніка

Що таке розширення грунтовки?

Розширення праймера - це техніка, яка використовується для пошуку конкретної послідовності РНК із суміші РНК та пошуку 5 'кінця стенограми мРНК. Він також використовується для вивчення структури РНК та експресії. Спосіб нарощування праймерів проводиться з міченими праймерами або з міченими нуклеотидами. Якщо використовуються мічені праймери, це виключає необхідність маркування нуклеотидів, які використовуються для синтезу кДНК. У цій техніці є кілька кроків. Він починається з вилучення РНК із зразка. Потім мічений олігонуклеотидний праймер додають до суміші разом з необхідними інгредієнтами для синтезу кДНК певної послідовності РНК. Грунтовка відпалює з додатковою послідовністю із суміші. Використовуючи послідовність, відпалену праймером в якості матриці, ферментна зворотна транскриптаза синтезує комплементарну ДНК (кДНК) послідовності РНК. Відпал праймерів і зворотна транскрипція відбуваються лише тоді, коли в пробі присутня конкретна послідовність РНК. Нарешті, коли проводиться денатурація гель-електрофорезу, можна визначити розмір послідовності РНК. Легко також знайти +1 підставу послідовності мРНК (сайт ініціації транскрипції) методом розширення праймера. Кількість мРНК, присутньої у зразку, можна кількісно визначити за допомогою цього методу, якщо використовується надлишок праймера.

Малюнок 02: Розширення грунтовки

Яка різниця між Nick Translate та Primer Extension?

Переклад Ніка проти розширення грунтовки
Переклад Ніка - це процес, який створює мічені ДНК-зонди для різних реакцій гібридизації.	Розширення праймера - це техніка, яка використовується для пошуку конкретної РНК або для вивчення експресії гена.
Використовувані ферменти
Використовуються ферменти ДНКази 1 та ДНК-полімерази.	Застосовується фермент зворотної транскриптази.
Важливість
Переклад Ніка полегшує маркування конкретної послідовності ДНК.	Розширення праймера дозволяє виявити конкретний розмір послідовності мРНК та кількість присутньої у зразку.

Підсумок - Переклад Ніка проти розширення грунтовки

Переклад Ніка - це метод, який використовується для синтезу мічених зондів на основі активності DNase 1 і Е coli Ферменти ДНК-полімерази 1. Це в пробірці метод, що застосовувався в лабораторіях до різних методів гібридизації. Під час трансляції псевдоніму 5'-3 'екзонуклеазна активність ДНК-полімерази 1 видаляє нуклеотиди попереду ніка, а полімеразна активність ДНК-полімерази 1 замінює видалені нуклеотиди з міченими нуклеотидами за ніком. Розширення праймера - це метод, який застосовується для виявлення конкретної транскрипту РНК із суміші та кількісного визначення розміру та кількості зацікавленої РНК. Це різниця між трансляцією ніків та розширенням грунтовки.

Список літератури
1. Рейд, Алекс. "Нік-переклад". Спрингер. Н.п., н.д. Веб. 18 квітня 2017р
2. "Розширення грунтовки". Національна діагностика. Н.п., н.д. Веб. 19 квітня 2017р
3. Куо, М. Т. та Плункетт. "Нік-трансляція метафазних хромосом: маркування in vitro нуклеазочутливих областей у хромосомах". Праці Національної академії наук Сполучених Штатів Америки. Національна медична бібліотека США, лютий 1985. Веб. 19 квітня 2017р
4. Раймонд та ін. “Простий, кількісний аналіз ПЛР-аналізу для прямого моніторингу мікроРНК та коротко інтерферуючих РНК”. РНК. Авторські права 2005 р. Товариством РНК, листопад 2005 р. Веб. 19 квітня 2017р

Надано зображення:
1. "Аналіз розширення праймера" від Jjnmmnjj - Власна робота (CC BY-SA 3.0) через Wikimedia Commons