Різниця між нітроцелюлозою та PVDF

Ключова різниця - нітроцелюлоза проти PVDF
 

Вестерн-блоттінг - це метод, який дозволяє виявити і кількісно визначити конкретні білки з білкового зразка. Надійність методики залежить від підбору правильної мембрани для всмоктування білків з гелю. Існують різні типи мікропористих мембран. Нітроцелюлозні та PVDF мембрани - це дві такі мембрани, які дослідники вважають за краще завдяки своїм особливим атрибутам порівняно з іншими типами мембран. Вибір між нітроцелюлозою або PVDF також є іншим завданням у західному блоттінгу. І нітроцелюлоза, і PVDF мають високу здатність до поглинання білка. Ключова відмінність між нітроцелюлозою і мембраною PVDF полягає в тому, що мембрани нітроцелюлози не мають здатності знімати антитіла та повторно використовувати мембрану для відтворення антитіл, в той час як мембрани PVDF мають здатність до відшарування та повторного використання.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке нітроцелюлоза
3. Що таке ПВДФ
4. Поплечне порівняння - нітроцелюлоза проти PVDF
5. Підсумок

Що таке нітроцелюлоза?

Нітроцелюлоза - це полімер, що виробляється обробкою целюлози азотною кислотою і використовується для отримання мікропористих мембран в молекулярній біології, особливо для таких методів блоттингу, як південне, північне та західне блоттінг. Розміри пори мембран нітроцелюлози коливаються від 3 до 20 мкм. Мікропорні мембрани нітроцелюлози сприяють виявленню імунохімічної реакції, що відбувається на поверхні мембрани. Тому нітроцелюлозні мембрани часто використовуються для іммобілізації білків та виявлення специфічних білків при вестерн-блоттінгу. Нітроцелюлозні мембрани також можуть іммобілізувати глікопротеїни та нуклеїнові кислоти.

Нітроцелюлозні мембрани переважні в аналізах бічного потоку через кілька особливостей. Нітроцелюлозні мембрани поглинають білки у високій концентрації. Розчинник, що використовується для змочування мембрани, не зменшує поглинання білка нітроцелюлози. Нітроцелюлозні мембрани можна легко розрізати до потрібного розміру гелю і переносити білки з гелю на мембрану за допомогою електричного або капілярного перенесення. Нітроцелюлоза дозволяє швидше протікати білки через мембрану з високим потенціалом зв'язування. Нітроцелюлоза демонструє поліпшену силу керованості. Ще одним особливим атрибутом нітроцелюлозної мембрани є те, що її можна легко склеїти водонепроникними клеями на різні пластикові підкладки.

Малюнок 01: Нітроцелюлозна мембрана для вестерн-блоттінгу

Що таке PVDF?

Полівінілідендифторид (PVDF) - фторполімер, що утворюється при полімеризації вінілідендифториду і має високу здатність до іммобілізації білків. Тому мікропористі мембрани, виготовлені з PVDF, використовуються в методах вестерн-блоттінгу для аналізу конкретних білків із сумішей білків. Мембрани PVDF можуть також використовуватися для аналізу амінокислот та секвенування білків. Найважливіша характеристика мембрани PVDF над мембраною нітроцелюлози полягає в тому, що її можна легко позбавити від антитіл і повторно використати для наступних зондів антитіл.

Мембрани PVDF товщі мембран нітроцелюлози; отже, більш стійкий до пошкоджень під час повторного використання. Мембрани PVDF відрізняються високою гідрофобністю. Тому перед використанням їх потрібно замочити в метанолі або ізопропанолі.

Чим відрізняється нітроцелюлоза від PVDF?

Нітроцелюлоза проти PVDF
Нітроцелюлоза - це полімер, що складається з целюлози.	PVDF - фторполімер, який отримують полімеризацією дифториду вінілідену.
Розмір пори мембрани
Типовий розмір пор - 0,1, 0,2 або 0,45μ	Типовий розмір пор - 0,1, 0,2 або 0,45 мкм
Ємність зв'язування білка
Нітроцелюлоза має білкову зв'язуючу здатність від 80 до 100 мкг / см2.	PVDF має здатність до зв'язування білка від 170 до 200 мкг / см2.
Чутливість
Це низька чутливість порівняно з PVDF.	Це має високу чутливість.
Виявлення слабо експресованих білків
Оскільки в мембранах нітроцелюлози низька чутливість, вона не підходить для виявлення низько експресованих білків.	Це більше підходить для виявлення низько експресованих білків через високу чутливості.
Фоновий шум
Це нижчий фоновий шум	Це підвищений фоновий шум.
Взаємодія з білками
Білкові молекули зв'язуються з нітроцелюлозними мембранами за допомогою гідрофобних взаємодій.	Білки зв'язуються з мембранами PVDF через гідрофобні та дипольні взаємодії.
Характер мембрани
Нітроцелюлоза крихка і тендітна. Однак існують версії нітроцелюлози, і вони стійкі.	ПВДФ більш міцний і має більш високу хімічну стійкість.
Можливість прокладки та повторного використання
Нітроцелюлоза може мати труднощі при зачистці та переробці без втрати сигналу.	PVDF ідеально підходить для відкоригування та послідовності застосувань.
Придатність
Нітроцелюлоза ідеально підходить для виявлення білків з низькою молекулярною вагою.	PVDF більше підходить для виявлення білків з більшою молекулярною масою.
Інші види використання
Нітроцелюлозу можна використовувати для аналізу нуклеїнової кислоти та промацування крапки / прорізу.	PVDF може бути використаний для секвенування білків і систем твердофазного аналізу.
Вартість
Це дешевше, ніж мембрани PVDF.	Це дорожче, ніж нітроцелюлозні мембрани.
Потреба в попередньому змочуванні
Нітроцелюлозні мембрани не вимагають попереднього замочування метанолом	Мембрани PVDF вимагають попереднього замочування метанолом.

Підсумок - Нітроцелюлоза проти PVDF

Нітроцелюлозні мембрани були першими мембранами, комерційно використовуваними для аналізу бічного потоку. Вони мають високу здатність до поглинання білків. Тому нітроцелюлозні мембрани застосовуються при вестерн-блоттінгу. PVDF - це інший тип мембран, що застосовується при вестерн-блоттінгу, і він також має високу здатність до поглинання білка. Обидва типи використовуються у вестерн-блоттінгу для аналізу білка. Однак мембрани PVDF мають більш особливі ознаки, що робить їх більш придатними, ніж нітроцелюлозні мембрани для вестерн-блот. Але нітроцелюлозні мембрани більше підходять для виявлення низькомолекулярних білків, мембрани PVDF є більш придатними для виявлення високомолекулярних білків. Це різниця між нітроцелюлозними і мембранами PVDF.

Надано зображення:
1. "Вестерн-блот трансфер" від Bensaccount в англійській Вікіпедії (CC BY 3.0) через Wikimedia Commons

Довідка:
1.Люк-Гарсія, Хосе Л., Ге Чжоу, Тун-Тянь Сонце та Томас А. Нойберт. "Використання нітроцелюлозних мембран для характеристики протеїну за допомогою матричної лазерної десорбції / іонізаційної масової спектрометрії". Аналітична хімія. Національна медична бібліотека США, 15 липня 2006 року. Веб. 28 березня 2017 року
2. "Молекулярні маркери та біотехнологія рослин". Книги Google. Н.п., н.д. Веб. 28 березня 2017 року
3.Майдон, 8 квітня 2013 року Tweet. "Магія в мембрані: вибирайте розумно для кращих результатів" Вестерн-Блот "." Біоспорядження. N.p., 08 квітня 2013. Веб. 28 березня 2017 року