Різниця між північним південним і західним плямами

Ключова різниця - Північний проти Південного проти Вестерн-Блоттінг
 

Виявлення специфічних послідовностей ДНК, РНК та білків є важливим для різних типів досліджень в молекулярній біології. Гель-електрофорез - це методика, яка розділяє ДНК, РНК та білки відповідно до їх розмірів. З гелевих профілів конкретна послідовність ДНК, послідовність РНК або білок виявляються за допомогою спеціальних методик, званих блоттінгом та гібридизацією з міченими зондами. Існує три різних способи промацування, а саме південна, північна та західна. Ключова відмінність між північним південним та західним блоттінгом полягає у типі молекули, яку він виявляє у зразку. Саузерн-блот - це метод, який виявляє конкретну послідовність ДНК із зразка ДНК. Північне плямування - це техніка, яка виявляє конкретну послідовність РНК із зразка РНК. Вестерн-блоттінг - це метод, який виявляє конкретний білок із зразка білка.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке південне пляма
3. Що таке північне пляма
4. Що таке Вестерн Блотінг
5. Поплечне порівняння - Північний проти Південного проти Західного блоттінга
6. Підсумок

Що таке Південний плям?

Техніка Саузерн-блоттінгу була розроблена Е. М. Саузерном у 1975 р. Для ідентифікації конкретної послідовності ДНК із зразка ДНК. Це перша методика промацування, введена в молекулярну біологію. Це дало змогу виявити специфічні гени з ДНК, конкретні фрагменти з ДНК і т. Д. У техніці південного блоттінгу є кілька етапів. Вони такі.

1. ДНК виділяють із зразка і перетравлюють рестрикційними ендонуклеазами.
2. Перетравлений зразок відокремлюють електрофорезом агарозного гелю.
3. Фрагменти ДНК в гелі денатуровані в окремі нитки за допомогою лужного розчину.
4. Однониткова ДНК переноситься на нітроцелюлозну фільтруючу мембрану капілярним переносом.
5. Перенесена ДНК фіксується на мембрані постійно.
6. Фіксована ДНК на мембрані гібридизована з міченими зондами.
7. Незв'язана ДНК вимивається з мембрани промиванням.
8. Рентгенівська плівка піддається впливу мембрани і готується авторадиограф.

Саузерн-блоттінг застосовується для різних аспектів молекулярної біології. Це корисно для RFLP-картографування, криміналістичних досліджень, метилювання ДНК в експресії генів, виявлення мутованих генів при генетичних порушеннях, відбитків пальців ДНК тощо.

Малюнок 01: Техніка південного затирання

Що таке Північне пляма?

Northern blotting - це метод, призначений для виявлення конкретної послідовності РНК або послідовності мРНК із зразка для вивчення експресії гена. Ця методика була розроблена Елвіном, Кемпом і Старком у 1979 році. Вона відрізняється від південної та західної техніки запікання завдяки декільком етапам. Однак ця методика також виконується за допомогою гелевого електрофорезу, блоттінгу та гібридизації із специфічними міченими зондами та детекцією. Техніка північного промацування виконується наступним чином.

1. РНК витягують із зразка і відокремлюють гель-електрофорезом.
2. РНК переноситься з гелю на промокальну мембрану і фіксується.
3. Мембрану обробляють міченим зондом, приготованим з кДНК або РНК (зонд є комплементарним певній послідовності у зразку).
4. Зонд інкубують з мембраною для зв'язування з певною послідовністю.
5. Незв'язані зонди змиваються.
6. Гібридизовані фрагменти виявляються за допомогою авторадіографа.

Північне блоттінг є важливим інструментом у виявленні та кількісній оцінці гібридизованої мРНК, вивченні деградації РНК, оцінці періоду напіввиведення РНК, виявленні сплайсингу РНК, вивченні експресії генів тощо.

Малюнок 02: Північна пляма

Що таке Вестерн Блотінг?

Вестерн-блоттінг - це метод виявлення специфічного білка з білкової суміші за допомогою міченого антитіла. Тому західний плям відомий також як імуноблот. Цю техніку ввів Тоубін та ін у 1979 р., і зараз він регулярно проводиться в лабораторіях для аналізу білка. Кроки такі.

1. Білки витягують із зразка
2. Білки відокремлюють за своїми розмірами за допомогою електрофорезу в гелі поліакриламіду
3. Відокремлені молекули переносяться в мембрану PVDF або нітроцелюлозну мембрану шляхом електропорації
4. Мембрана блокується для неспецифічного зв'язування з антитілами
5. Перенесені білки зв'язуються з первинними антитілами (антитілами, мічені ферментами).
6. Мембрану промивають для видалення неспецифічно пов'язаних первинних антитіл
7. Зв'язані антитіла виявляються додаванням субстрату та виявленням утвореного кольорового осаду

Вестерн-блоттінг корисний при виявленні антитіл проти ВІЛ у зразку сироватки людини. Вестерн-блот можна також використовувати як підтверджуючий тест на інфекцію гепатиту В і остаточний тест на хворобу божевільної корови.

Малюнок 03: Вестерн Блотінг

Яка різниця між Північним Південним та Західним Блоттінгом?

Північний проти Південного проти Вестерн-Блотінг
Тип виявленої молекули
Північна пляма	Northern blotting виявляє специфічну послідовність РНК із зразка РНК.
Південне пляма	Саузерн-блоттінг виявляє специфічну послідовність ДНК із зразка ДНК.
Вестерн Блотінг	Вестерн-блоттінг виявляє специфічний білок із зразка білка.
Тип гелю
Північна пляма	Для цього використовується гель агароза / формальдегід.
Південне пляма	Для цього використовується гель агарози.
Вестерн Блотінг	Для цього використовується поліакриламідний гель.
Метод блотінгу
Північна пляма	Це капілярна передача.
Південне пляма	Це капілярна передача.
Вестерн Блотінг	Це електрична передача.
Використовувані зонди
Північна пляма	кДНК або РНК-зонди, мічені радіоактивно або нерадиоактивно.
Південне пляма	ДНК-зонди маркуються радіоактивно або нерадиоактивно.
Вестерн Блотінг	Первинні антитіла використовуються як зонди.
Система виявлення
Північна пляма	Це робиться за допомогою авторадіографа, або виявлення світла або зміни кольору.
Південне пляма	Це робиться за допомогою авторадіографа, виявлення світла або зміни кольору.
Вестерн Блотінг	Це робиться за допомогою виявлення світла або зміни кольору.

Підсумок - Північний проти Південний проти Вестерн Блоттінг

Блотування - це спеціальна методика, розроблена для ідентифікації конкретної ДНК, РНК або білка із зразків. Існують три окремі процедури блоттінгу, а саме північна, південна та західна для виявлення конкретного типу молекули. Техніка північного блоттування призначена для виявлення конкретної послідовності РНК із суміші РНК. Техніка Саузерн-блоттінгу дозволяє виявити специфічну послідовність ДНК із зразка ДНК, а методика вестерн-блоттінгу розроблена для виявлення конкретного білка з білкової суміші.

Список літератури
1. Гіббонс, Джанай. "Вестерн-Блот: Огляд перенесення білка". Північноамериканський журнал медичних наук. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, Mar. 2014. Web. 27 березня 2017 року
2. Браун, Т. «Саузерн-плямінг». Поточні протоколи в імунології. Національна медична бібліотека США, травень 2001. Веб. 27 березня 2017 року
3. Він, Шань Л. "Північна пляма". Методи ензимології. Національна медична бібліотека США, 2013. Веб. 27 березня 2017 року

Надано зображення:
1. "Схема північної плями" за RNA405 - власна робота (публічне надбання) через Wikimedia Commons
2. "Western blot 114A" від Amanthabagdon - Власна робота (Public Domain) через Commons Wikimedia