Різниця між теплою та холодною трипсинізацією

Ключова різниця - Теплий проти Холодний Трипсинізація

Тепла і холодна трипсинізація - це два методи, що застосовуються при ферментативній дезагрегації клітин при культивуванні клітин тварин. The ключова різниця між теплим і холодним трипсинізацією, як підказують назви, залежить від температури, при якій додається трипсин для клітинної дезагрегації. Тепла трипсинізація відбувається в умовах більш високих температур (36,5 - 37 ⁰C) тоді як трипсинізація холоду відбувається в умовах низьких температур.

У процесі культивування первинних клітин клітин тварин використовуються три основні методи, які виявилися успішними. Три методи включають механічну дезагрегацію клітин, ферментативну дезагрегацію клітин та первинну методику експлантації. Ферментативна дезагрегація клітин, що призводить до виділення клітин, і це відбувається ферментом трипсину, що руйнує білок. Тому цей процес відомий як трипсинізація. Трипсинізацію можна проводити за двох різних умов, а саме теплої трипсинізації та холодної трипсинізації. Тепла трипсинізація - це метод обробки клітин трипсином в теплих умовах при температурі 36,5 - 37 ⁰C. Холодна трипсинізація - це процес лікування трипсином, який проходить у більш холодних умовах, переважно у льоду, підтримуючи дуже низькі температури.

ЗМІСТ

1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке тепла трипсинізація
3. Що таке холодна трипсинізація
4. Подібність між теплим і холодним трипсинізацією
5. Поплечне порівняння - тепла трипсинізація проти холодної у табличній формі
6. Підсумок

Що таке тепла трипсинізація?

Трипсинізацію можна проводити для дезагрегації клітинних компонентів з метою виділення клітин для отримання первинної клітинної культури. Трипсин є ферментом деградації білка, і ферментна суміш, яка використовується при трипсинізації, може бути або сирим екстрактом, або очищеним продуктом. Кажуть, що сирий екстракт є більш ефективним при лізисі білків і розпаді клітин, оскільки містить інші деградуючі ферменти.

Тепла трипсинізація - це найчастіше застосовуваний ферментативний метод дезагрегації клітин, який відбувається в умовах більш високих температур. Перед лікуванням за допомогою трипсинізації бажану тканину подрібнюють на більш дрібні шматочки. Це сприяє легкому процесу дезагрегації. Потім подрібнену тканину промивають у спеціальному середовищі, відомому як середовище розсічення базальної солі.

Після завершення етапу промивання клітини перетворюються в колбу, що містить активний фермент, який є трипсином. Оскільки ця методика передбачає теплий протокол трипсинізації, трипсин поміщають при температурі близько 37 ⁰C протягом приблизно чотирьох годин.

Малюнок 01: Трипсин

Вміст перемішують і перемішують, використовуючи методи центрифугування для зручності протоколу та для прискорення процесу дезагрегації. Після досягнення рекомендованого часу клітини можуть бути отримані з супернатанту. Клітини, отримані з супернатанту, потім інкубують при певній температурі та часі.

Що таке холодна трипсинізація?

Холодна трипсинізація - це інший тип трипсинізації, який відбувається в холодних умовах. У цій техніці подрібнені та промиті клітини поміщають у флакони на лід, а потім просочують трипсином. Період замочування набагато довший - приблизно 6 - 24 години.

Після завершення процедури замочування трипсин видаляють з клітинного лізату, а шматочки тканини додатково інкубують при 37⁰C протягом приблизно 20 - 30 хвилин. Дезагрегація клітин відбувається шляхом повторного піпетування тканинної суміші. Це дозволить клітинам відмежуватися від мембрани і надходити до супернатанту. Як тільки клітини знаходяться в супернатанті, їх інкубують і вирощують при бажаній температурі та періоді часу.

Метод холодного трипсинізації має ряд переваг

Більш високий вихід життєздатних клітин, оскільки пошкодження клітин зводиться до мінімуму. Пошкодження клітин зводиться до мінімуму, не використовуючи етапів центрифугування.
Дуже зручний метод.
Менш трудомісткі.

Основне обмеження методу холодного трипсинізації полягає в тому, що великі кількості не можна використовувати в одному випадку.

Які подібності між теплим і холодним трипсинізацією?

І теплий, і холодний процеси трипсинізації використовують фермент трипсин для дезагрегації клітин.
І теплі, і холодні процеси трипсинізації використовуються в процедурах культивування клітин для дезагрегації клітин.
У процедурах лікування теплої та холодної трипсинізації клітини отримують із супернатанту.

Яка різниця між теплою та холодною трипсинізацією?

Тепла проти холодної трипсинізації
Тепла трипсинізація - це метод обробки клітин трипсином в теплих умовах при температурі 36,5 - 37 ⁰.	Холодна трипсинізація - це процес лікування трипсином, який проходить у більш холодних умовах, переважно у льоду, підтримуючи дуже низькі температури.
Протокол
Нарізані шматочки тканини підтримують при 37 ⁰C постійно протягом всієї процедури.	Подрібнені шматочки тканини спочатку підтримують при ожеледиці, а потім підтримують при 37 ⁰.
Температура
Тепла трипсинізація відбувається в 36,5 - 37 ⁰	Холодна трипсинізація відбувається при холодних температурах.
Спожитий час
Менший час, необхідний для всього процесу (близько 4 годин) теплого трипсинізації.	Більш тривалий час, необхідний для холодного трипсинізації.
Врожайність життєздатних клітин
Мало тепла трипсинізація.	Висока холодна трипсинізація.
Використання центрифугування
Центрифугування потрібно для дезагрегації клітин при теплій трипсинізації.	Центрифугування не потрібно при холодній трипсинізації.
Початкова кількість тканини для трипсинізації
Більшу кількість тканини можна використовувати при теплій трипсинізації.	Менша кількість тканини може використовуватися при холодній трипсинізації.
Пошкодження клітин
Високий завдяки центрифугуванню в теплій трипсинізації.	Менше через холодну трипсинізацію.

Підсумок - Теплий проти Холодний Трипсинізація

Трипсинізація - це метод використання ферменту трипсину, що руйнує білок, для дезагрегації та отримання первинних клітинних культур під час культивування клітин. Існують дві основні методи трипсинізації на основі температур, що використовуються під час процедури. Вони - це теплі та холодні трипсинізації. Тепла трипсинізація проводиться в 37 ⁰C, тоді як холодна трипсинізація проводиться в крижаних умовах. Хоча холодна трипсинізація потребує більш тривалого часу для її завершення, але, як кажуть, вона має більший вихід життєздатних клітин. Це пов'язано з тим, що пошкодження клітин зводиться до мінімуму при холодній трипсинізації, оскільки воно не використовує енергійних етапів центрифугування. Це різниця між теплою і холодною трипсинізацією.

Довідка:

1. «Трипсинізація». Трипсинізація - огляд | Теми ScienceDirect. Доступний тут
2. «Первинна культура клітин: 3 методики (зі схемою)». Дискусія з біології, 16 жовтня 2015. Доступна тут

Надано зображення:

1.'Активний сайт трипсина 'від Fdardel - Власна робота, (CC BY-SA 3.0) через Wikimedia Commons

Наука та природа