Різниця між RT-PCR і QPCR

Полімеразна зворотна транскрипційна ланцюгова реакція (RT-PCR)

RT-PCR проти QPCR

Просування в галузі біотехнології призвело до відкриття кількох способів впоратися з потребами в трансплантації органів протягом багатьох років. Раніше особа, яка добровільно пожертвувала будь-який орган одразу після смерті пацієнту, який потребував, міг лише запустити операцію з трансплантації. Постійні дослідження та дослідження біологів призводять до відкриття стовбурових клітин.

Стовбурові клітини відносяться до тих, які взяті з ДНК ембріона, які слугуватимуть джерелом для регенерації клітин, який, в основному, буде клоном органу, де отримана ДНК. Хоча правозахисники лобіюють зупинку подібних процедур, успішні операції дійсно довели ефективність розвитку стовбурових клітин при пересадці органів..

Перш ніж можна оцінити і повністю зрозуміти стовбурові клітини, однак, необхідно ознайомитися з різними термінологіями, пов'язаними з цим науковим відкриттям. Вирощування стовбурових клітин займається ДНК та її кодуванням. Таким чином, для студентів або будь-яких людей, зацікавлених у цій галузі, важливо диференціювати RT-PCR і qPCR.

Полімеразна ланцюгова реакція зворотної транскрипції (RT-PCR) є одним із багатьох варіантів ланцюгової реакції полімерази, або ПЛР. Ця лабораторна методика широко використовується в молекулярній біології для того, щоб вчені створили кілька копій певної послідовності ДНК шляхом процесу, створеного як "ампліфікація". Різниця між RT-PCR і традиційною PCR полягає в тому, що РНК спочатку транскрибується зворотно в її ДНК-комплемент, який використовує зворотну транскриптазу. Нова комплементарна ДНК, що містить зворотну транскрипцію, буде потім ампліфікована за допомогою традиційної ПЛР або ПЛР у реальному часі..

Більшість студентів, які вивчають цей процес, часто роблять помилку при обміні ПЛР зворотної транскрипції та ПЛР у режимі реального часу, оскільки обидва скорочуються аналогічно. Щоб уникнути плутанини, біологи позначають ПЛР у реальному часі як кількісну ПЛР у реальному часі або qPCR.

QPCR сильно відрізняється від RT-PCR, оскільки qPCR відповідає за вимірювання ампліфікації в міру її виникнення. Можна сказати, що RT-PCR запускає процес ампліфікації, тоді як qPCR вимірює його в міру проведення процедури.

Кількісна ПЛР у реальному часі

QPCR фактично змінив традиційний метод одностороннього підходу, коли йдеться про кількісну оцінку ДНК та РНК, оскільки застосування методу qPCR дає можливість біологам визначити початкову концентрацію нуклеїнової кислоти ще до того, як результати реакції були помічені і записано вниз.

Застосування qPCR, який зараз вважається найпотужнішим та чутливим методом аналізу для генетичних досліджень, значно розширився. В даний час він бере участь у кількісному аналізі експресії генів, генотипуванні, виявленні патогенів та аналізі SNP, а також вимірювання інтерференції РНК..

QPCR часто поєднується з процесом зворотної транскрипції для кількісної оцінки месенджерної РНК та мікроРНК, присутньої в клітинах тканин, що спостерігаються та експериментуються. Це дає ще одну видиму різницю між двома: RT-PCR може використовуватися для процесу ампліфікації, але його потрібно злити з qPCR для кількісної оцінки.

QPCR також є більш кількісним, оскільки дані можуть бути зібрані в міру прогресування експоненціальної фази зростання (log) ПЛР. Біологи відзначають, що кількість побічного продукту ПЛР прямо пропорційне кількості нуклеїнової кислоти шаблону, яка буде вимірюватися через qPCR.

З іншого боку, RT-PCR далеко не має кількісного характеру, оскільки дотримання інтенсивності посиленої смуги на гелі, що відповідає встановленому стандарту концентрації, може призвести до отримання «напівкількісного» висновку.

Підсумок:

1.QPCR і RT-PCR - це терміни, які використовуються в біотехнології та використовуються для отримання декількох копій ДНК.
2.RT-PCR використовується для посилення зворотної транскрипції коду ДНК; QPCR вимірює посилення.
3.RT-PCR призначений для ампліфікації, тоді як qPCR - для кількісного визначення.
4.QPCR має кількісний характер, тоді як RT-PCR - ні.