Різниця між прямим та непрямим ІФА

Ключова різниця - Прямий та непрямий ІФА
 

Імуноферментний аналіз (ІФА), також відомий як імуноферментний аналіз, є серологічним тестом, який виявляє антитіла в крові. Він використовується як діагностичний інструмент для з'ясування того, чи був пацієнт підданий дії певного типу вірусу чи іншого збудника інфекції (антигену) та чи виробляв організм антитіла проти інфекції. ІФА також може виявити минулі та поточні інфекції. Отже, ІФА часто використовується в якості попереднього тестування лікарями перед поглибленим аналізом захворювань. Цей тест можна виконати в лабораторії, взявши у пацієнта пробу крові. Існує два типи ІФА-тесту: прямий ІФА та непрямий ІФА. Ключова відмінність між прямим та непрямим ІФА полягає в тому непрямий ІФА більш чутливий і вимагає додавання вторинного антитіла поки прямий ІФА менш чутливий і використовує лише первинне антитіло.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке прямий ІФА
3. Що таке непрямий ІФА
4. Порівняльне порівняння - Прямий та непрямий ІФА
5. Підсумок

Що таке прямий ІФА?

ІФА - це діагностичний тест на хворобу, який проводиться для виявлення наявності в крові певних антигенів або антитіл. Це робиться як пластинковий аналіз. Він використовує антитіла, пов'язані з легко досліджуваними ферментами. Присутність антигенів у зразку сироватки зв'язується зі специфічними антитілами, пов'язаними з ферментами. На завершальному етапі додають специфічний субстрат для реакції з ферментом. Фермент перетворює субстрат у кольоровий або сигнальний продукт. Зміна кольору хімічного субстрату виявляє наявність у зразку сироватки конкретного антитіла. Прямий тест ІФА використовує лише первинне антитіло, пов'язане з ферментом. Зв'язуючись з антигеном, він швидко змінює колір, що свідчить про наявність збудника інфекції в крові. Однак інтенсивність сигналів у прямого ІФА слабшає, оскільки епітопи обмежені зв'язуванням антигенів. Отже, прямий ІФА є менш чутливим порівняно з непрямим ІФА.

Малюнок 01: Прямий тест ІФА

Що таке непрямий ІФА?

ІФА можна проводити з використанням двох типів антитіл, а саме; первинне антитіло та вторинне антитіло. Непрямий інструмент ELISA використовує обидва типи антитіл для посилення сигналів для кращого виявлення. Непряма методика ІФА виконується наступним чином.

1. Пластинки інкубують з антигенами і промивають для блокування неспецифічного зв'язування.
2. Потім додають первинні антитіла і промивають.
3. Додані та промиті вторинні антитіла, пов'язані з ферментами.
4. Додається субстрат і дається реакція з ферментами.
5. Виявляються сигнали, і виявляється наявність або відсутність специфічного антигену в пробі.

У непрямому тесті ELISA кілька вторинних антитіл можуть зв'язуватися з одним первинним антитілом. Вторинні антитіла пов'язані з легко аналізованими ферментами. Тому одне зв’язування може подавати сильний сигнал завдяки більш ніж одній взаємодії. Отже, непрямий ІФА більш чутливий, ніж прямий ІФА. Однак непрямий ІФА може подавати неспецифічні сигнали через перехресні реакції вторинних антитіл.

Малюнок 02: Непрямий тест ІФА

Яка різниця між прямим та непрямим ІФА?

Прямий проти непрямого ІФА
Прямий ІФА менш чутливий порівняно з непрямим ІФА.	Непряма ІФА більш чутлива.
Зайнятий час
Прямий тест ІФА - це швидкий процес.	Непряма ІФА забирає багато часу.
Застосування антитіл
У прямому ІФА використовується лише один тип антитіл (Первинні антитіла).	Первинні та вторинні антитіла використовують для непрямого ІФА.
Посилання з ферментами
Первинні антитіла пов'язані з ферментами.	Вторинні антитіла пов'язані з ферментами.
Перехресна реакція другого антитіла
Прямий ІФА виключає перехресну реакційну здатність другого антитіла.	Непрямий ІФА впливає на перехресну реакційну здатність другого антитіла.
Сигнали
Сигнали слабкі порівняно з непрямим ІФА.	Сигнали посилюються при непрямому ІФА. Отже, це легко виявити.

Підсумок - Прямий та непрямий ІФА

ІФА - це біохімічна методика, що використовується в основному в імунології для виявлення присутності антитіла або антигену в зразку крові пацієнта. Він може здійснюватися за допомогою двох процесів, відомих як прямий або непрямий ІФА. Прямий тест ELISA використовує лише первинні антитіла для виявлення антигену, тоді як непрямий ІФА використовує як первинні, так і вторинні антитіла. У прямому ІФА маркуються первинні антитіла, тоді як у непрямому ІФА мічуються вторинні антитіла. Це різниця між прямим та непрямим ІФА.

Список літератури
1. "Аналіз на імуноферменти, пов'язаний з ферментами (ІФА)." Вісник Всесвітньої організації охорони здоров'я. Національна медична бібліотека США, 1976. Веб. 29 березня 2017 року
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen, J. Van Der Veen. "Аналіз на імунофербент, пов'язаний з ферментами, який використовує мічений антиген для виявлення антитіл до імуноглобуліну М та А при токсоплазмозі: порівняння з непрямим імунофлуоресценцією та аналізом на імунофербент, пов'язаний з подвійним сендвіч". Журнал клінічної мікробіології. Національна медична бібліотека США, червень 1983. Веб. 29 березня 2017 року

Надано зображення:
1. «Діаграма ELISA» Кавітрі - Власна робота (CC BY 3.0) через Вікісховище Commons 
2. «Непряма ELISA» Каванг - Власна робота (CC0) через Вікісховище Commons