Різниця між сторінкою SDS та Western Blot

Ключова різниця - Сторінка SDS щодо Western Blot
 

Вестерн-блоттінг - це техніка, яка виявляє конкретний білок із зразка білка. Ця методика виконується за допомогою декількох ключових етапів: гель-електрофорез, блоттінг та гібридизація. Електрофорез гель-додецилсульфату натрію поліакриламіду (SDS Page) - це різновид гель-електрофорезу, який використовується для розділення білків відповідно до їх розмірів (молекулярна маса). Вестерн-блот - це спеціальний аркуш промокальної мембрани, який використовується для передачі тієї ж картини білків у SDS Page. Ключова відмінність між Сторіною SDS та Western blot полягає в тому, що SDS Page дозволяє розділити білки в суміші поки Вестерн-блот дозволяє виявити і кількісно визначити конкретний білок із суміші. Обидва вони корисні в дослідженнях аналізу білка.

ЗМІСТ
1. Огляд та ключові відмінності
2. Що таке сторінка SDS
3. Що таке Вестерн-Блот
4. Поплечне порівняння - сторінка SDS проти Western Blot
5. Підсумок

Що таке сторінка SDS?

SDS Page - це метод гелевого електрофорезу, який використовується для поділу білка. Його зазвичай використовують у біохімії, генетиці, криміналістиці та молекулярній біології. Після вилучення білків із зразка їх наносять на гель, що складається з SDS та поліакриламіду. SDS - це аніонний миючий засіб, який використовується для лінеалізації білків (денатураційних білків) та надання негативного заряду лінеаризованим білкам, пропорційним їх молекулярній масі. Поліакриламід стає твердою опорою гелю. Денатуровані білки, які негативно заряджаються, мігрують у бік позитивного кінця апарату через гель. За розмірами білків швидкості міграції відрізняються між білками і відбувається поділ. Тому сторінка SDS корисна для поділу окремих білків виходячи з їх розмірів.

Приготування поліакриламідного гелю для фракціонування білків є найважливішим кроком для SDS. Правильна концентрація поліакриламіду та тип використовуваного зшиваючого агента сильно впливають на фізичні властивості гелю, що робить фактичне поділ різних білків. Розміри пор гелю повинні бути належним чином керовані для ефективного відділення. Однак SDS Page розглядають як техніку поділу білка високої роздільної здатності.

Техніка SDS Page має головне обмеження в аналізі білка. Оскільки SDS денатурує білки до сепарації, це не дозволяє виявити ферментативну активність, взаємодію зв'язування білка, кофактори білка тощо.

Малюнок 01: Сторінка SDS

Що таке Вестерн-Блот?

Техніка вестерн-блоттінгу дозволяє виявити конкретний білок із білкової суміші та виміряти кількість та молекулярну масу білка. Вестерн-блот - це мембрана, яка використовується під час процедури блоттінгу для отримання дзеркального зображення білкових зразків у гелі SDS-поліакриламіду. Мембрана, яка використовується для вестерн-блоттінгу, здебільшого складається з нітроцелюлози або полівініліден-дифториду (PVDF). Мембрану з перенесеним білком можна використовувати для ідентифікації бажаного білка. Це вимагає високоякісного антитіла для виявлення бажаного білка шляхом гібридизації. Антитіло зв'язується зі своїм специфічним антигеном і виявляє наявність бажаного антигену, який є білком.

Перенесення білків з поліакриламідного гелю SDS до західного блоту здійснюється електроблоттінгом. Це ефективний і швидкий метод, який змушує білки електрофорезувати з гелю і переходити на нітроцелюлозну мембрану (вестерн-блот).

Малюнок 02: Вестерн-Блот

Яка різниця між ПДР Сторінкою та Вестерн Блотом?

Сторінка SDS проти Western Blot
SDS Page - це метод електрофорезу гелів.	Вестерн-блот - це техніка, яка виконується на мембрані для виявлення конкретного білка із суміші.
Використовуйте
Сторінка SDS дозволяє розділити білки відповідно до їх розмірів.	Вестерн-блот дозволяє переносити білки на гель сторінки SDS без зміни його структури і дозволяє гібридизацію зі специфічними антитілами.
Недоліки
Денатурація білка, дорожнеча та наявність нейротоксинових хімікатів - недоліки цієї методики.	Ця методика забирає багато часу і вимагає хороших досвідчених особистих та конкретних контрольованих умов.

Підсумок - Сторінка SDS проти Western Blot

Сторінка SDS та вестерн-блот - це два методи, що беруть участь у аналізі білка. SDS Page дозволяє легко розділити білки на гелі відповідно до їх молекулярної маси. Вестерн-блот допомагає підтвердити наявність і кількість конкретного білка шляхом гібридизації зі специфічними антитілами. Це різниця між ПДР Сторін та Вестерн-блотом.

Список літератури:
1. Бланчер, К. і А. Джонс. "SDS-STRAGE та методи західного блокування". Методи молекулярної медицини. Національна медична бібліотека США, n.d. Веб. 27 березня 2017 року
2. Новоковський, Ендрю Б., Вільям Дж. Вобіг та Девід Х. Пітінг. “Native SDS-PAGE: Електрофоретичне розділення білків високої роздільної здатності із збереженням корінних властивостей, включаючи зв'язані металеві іони”. Металоміка: інтегрована наука про біометал. Національна медична бібліотека США, травень 2014. Веб. 27 березня 2017 року.

Надано зображення:
1. "Електрофорез SDS-PAGE" від Bensaccount в англійській Вікіпедії (CC BY 3.0) через Вікісховище Commons
2. "Western blot 114A" від Amanthabagdon - Власна робота (Public Domain) через Commons Wikimedia