Різниця між ПЛР та ПЛР у режимі реального часу

ПЛР проти ПЛР у режимі реального часу

ПЛР або ланцюгова реакція полімерази - це революційне відкриття в сучасній молекулярній біології, яке вперше було розроблено хіміком Карі Муллісом у 1983 році. Це дозволяє ампліфікувати одну послідовність у складній ДНК для аналізу. Основна ідея ПЛР полягає в тому, що два праймери, які є комплементарними протилежним ланцюжкам послідовності ДНК, орієнтовані один на одного; праймери отримують додаткові нитки, кожна з яких містить інший праймер. Отже, результат - велика кількість послідовності, що відповідає ДНК, яка лежить між двома праймерами. Фермент ДНК-полімерази використовується для розширення праймерів у ПЛР. ДНК-полімераза є термостабільним ферментом, і вона має здатність виживати при високих температурах (від 94 до 95 ° C), що використовуються для денатурації шаблону ДНК.

ПЛР включає три етапи, а саме - повторні раунди денатурації, відпалу праймерів та синтезу ДНК. Для проведення цієї реакції використовується термоциклічна машина, щоб вона могла бути запрограмована на швидку та точну зміну температур. Застосування ПЛР - це кримінальне розслідування, відбиток ДНК, виявлення збудників та аналіз ДНК ранніх видів людини.

Що таке звичайна ПЛР?

Існує три основні стадії звичайної ПЛР, а саме; Стадія ампліфікації ДНК, відділення ПЛР та виявлення продуктів. Поділ сегментів ДНК, як правило, проводиться електрофорезом агарозного гелю. Потім продукти фарбують етеидуимом бромідом. Нарешті, виявлення досягається візуалізацією смуг на гелі під УФ-світлом. Тому кінцеві результати звичайної ПЛР не виражаються як числа. Зазвичай звичайна ПЛР здатна виявити лише один параметр.

Що таке ПЛР у режимі реального часу?

ПЛР у режимі реального часу може виявити посилення продуктів, оскільки продукти синтезуються. З розвитком технології ПЛР стала дуже популярною методикою, особливо для виявлення та ідентифікації бактерій у продуктах харчування. ПЛР у режимі реального часу використовує флуоресцентну фарбувальну систему та термоциклер, оснащений флуоресцентною здатністю детектувати.

Яка різниця між звичайною ПЛР та ПЛР у режимі реального часу?

• Звичайна ПЛР займає більше часу, оскільки для аналізу ампліфікованих продуктів ПЛР використовується гель-електрофорез. На противагу цьому ПЛР у реальному часі займає менше часу, оскільки може виявити посилення під час ранніх фаз реакції.

• ПЛР у реальному часі збирає дані на фазі експоненціального росту ПЛР, тоді як традиційна ПЛР збирає дані в кінцевій точці реакції.

• Результати кінцевої точки звичайної ПЛР можуть бути не дуже точними, але результати ПЛР у реальному часі дуже точні.

• ПЛР у режимі реального часу є більш чутливою, ніж звичайна ПЛР.

• Звичайна ПЛР має дуже низьку роздільну здатність, тоді як ПЛР у реальному часі може виявити дуже незначні зміни через високу роздільну здатність.

• Виявлення кінцевої точки звичайної ПЛР має короткий динамічний діапазон, тоді як виявлення ПЛР у реальному часі має широкий динамічний діапазон.

• На відміну від звичайних ПЛР, автоматизовані методи виявлення знаходяться в ПЛР у режимі реального часу.

• Звичайна ПЛР відрізняється високою складністю та трудомісткістю, ніж ПЛР у режимі реального часу.

• На відміну від ПЛР у режимі реального часу, звичайна ПЛР не може розрізняти мертві та живі бактерії.

• ПЛР у режимі реального часу використовує флуоресцентну систему барвників для виявлення продуктів, тоді як звичайна ПЛР використовує бромід етидію та УФ-світло для візуалізації смуг у агарозному гелевому середовищі.